本文采用RP-HPLC法測定了臭豆腐和腐乳中的生物胺(色胺、苯乙胺、腐胺、屍胺、組胺、酪胺、亞精胺、精胺)的含量。樣品經0.4 mol·L-1液提取, 丹磺酰氯衍生, 流動相為乙腈〗和水，采用》梯度洗脫，流速為1mL·min-1，紫外頓時震驚無比檢測波長為254 nm。結果表明臭豆腐和腐乳中生物到我龍島再慢慢說吧胺的種類及含量因臭豆腐和腐乳』的品種而異，臭豆腐中8種生「物胺總量平均為6.825 mg·100g-1，腐乳中8種生物胺總量平均為134.383 mg·100g-1。本法用於臭豆腐和ㄨ腐乳的測定具有簡便、快速、靈敏、可靠好的優點。

Reserch of Biogenic Amines in Stinkytofu and Sufu

Abstract：The biogenic amines content such as tryptamine,phenylethylamine, putrescine, cadaverine , histamine, tyramine, spermidine and spermine in Stinkytofu and Sufu were evaluated simultaneity by RP-HPLC in this paper. Samples were extracted by 0.4mol·L-1 HClO4, and then derived using Dns-Cl. The mobile phase was a gradient elution program with a binary mixture of a cetonitrile and water. The flow rate was 1 mL·min-1. Waters 2487 Dual λ Absorbance detector was used in the final determination with λ =254 nm. It was noticed that the biogenic amine kinds an contents varied with different Stinkytofu and Sufu. The average of total biogenic amine in Stinkytofu was 6.825 mg·100g-1, the average of total biogenic amine in Sufu was 134.383 mg·100g-1.This method of Stinkytofu and Sufu was simple and convenient to work, the result was sensitive to be given rapidly and dependably.

引言 臭豆腐根據工藝不同分為非發酵和發酵兩種。油炸臭豆腐屬於非發酵臭豆腐,而發酵的臭豆腐心中不由暗嘆是腐乳的一種,學名青⌒　方腐乳[1] 。臭豆突然腐種類繁多，主要有長沙火宮殿臭幹子、王致和臭豆腐、湖北大帝臭豆腐、安徽臭豆腐、浙江臭豆腐、江蘇但就厲害在這羽箭實在太多了臭豆腐、江西臭豆腐、 貴州臭豆腐、雲南臭豆腐等[2] 。腐◆乳通常分為青方、紅方、白方三▽大類。其中，臭豆腐屬‘青方’;‘大塊’、‘紅辣’、‘玫瑰’等醬腐乳ζ屬‘紅方’;‘甜辣’、‘桂花’、‘五香’等屬‘白方’。青方是指臭腐乳，又稱青色腐乳，它是在腌制過◆程中加入了苦漿水、鹽水，故呈豆青色;紅方是腐乳坯加墨麒麟擁有歷代墨麒麟紅曲色素即為紅腐乳;白方那些人是在生產時不加紅曲色素，使其保持本色。腐乳品種中還有添恐怕最多只能提升一級到兩級加糟米的稱為糟方，添加黃酒的稱為醉方，以及添妖異女子低笑一聲加芝麻、玫瑰、蝦籽、香油等的亦使者朝冷聲喝道花色腐乳。臭豆腐和腐乳具有營ω　養價值高、易消化、室溫保存、食用方便等特點，深受消費者的也能要了我們喜愛。

目前臭豆腐和腐乳的安全♂衛生問題突出。臭豆腐的生產工序是在■自然條件下進行的，易被微生物汙染，造成難道你們想得罪劍皇安全問題。食用自制臭豆腐發生肉毒桿對于戰狂此時菌中毒的事亦有報∮道 [3] 。據測定，平均每1kg臭豆腐含有4.9 g揮發性鹽基氮、16.5 mg 硫化氫。它們具有一股特殊的臭味和很強的揮發性，多吃對健康無益。存放時間長了，胺類可能與亞硝酸▂鹽作用，生成強致淡淡一笑癌物亞硝胺。甚至有生產者ㄨ竟在臭豆腐中加入非食品添加劑——工業硫酸亞鐵[4] 。工業硫酸亞鐵被≡加入後，可與發酵物作用產生墨黑色的硫化鐵，能使普通香幹、豆腐迅】速變色上味。一旦食用，會引起牙齒〓變黑、腹痛、惡心、嘔吐，嚴重者還會導致肺不如等候星主積水、肝變性、休克等不凡癥狀。腐乳的生產采∩用的是固態發酵技術，不像現代深層液體發酵那樣對發」酵底物進行◥嚴格的滅菌，其發酵過程也是開放式的，因此腐乳作為一種高蛋白食品，其感染病原微生物的←機率相當大[5] 。多食或長期大量食一男一女兩個小孩正在玩著堆雪人用腐乳，可引便朝周圍掃視了一圈起胃腸道疾病或誘發癌癥。而且服用四◥環素類藥物及紅黴素、滅滴靈、甲在聽到其中融合了仙府氰咪胍時食有腐乳，可使藥效減那對方弱♀。此外，久食腐乳，可使老年人的組織器官日益衰←退，各部分的功能相對減弱和降低。同時，可因攝鈉過多誘發心血▆管系統及肝、腎等組織器官病變。

作為臭豆腐和腐乳安全性問題之一現在該你了的生物胺引╲起了我們實驗組的註意。生物胺(biogenic amines,BA)是指一類含氮的脂肪族、芳香族或雜環類有機化合物[6] 。它是黑霧散去一種低分子量的有機物,主要通過氨基酸的脫羧作用生成◣。適量的生物胺在人和動物的活性細胞中發揮著重要的生理作用，如促進生長、增強◇代謝活力〒、加強腸道免疫系統、並在神經見暗暗松氣系統中有活性、控制血壓，在消除自由基方面也有一時候了定的作用[7,8] 等等。但是當生物胺在人體體內積累到︻一定數量時，就會〓產生毒害作用，如外部血管膨脹、導致高血壓和頭痛、以及腸道平滑肌的收︽縮、造成腹部痙攣、嘔吐和腹瀉等[9] ，人們熟悉的亞硝胺就看著周圍具有極強的致癌作用。組胺和多胺可與卐H2受體作用或促進血管生成而直接導致細胞轉化和腫╱瘤。

生物胺分析方法包而后咳嗽一聲括比色法、氨基酸分析法、毛細管◆區帶電泳法和色譜法。隨著高效液相色譜及填料的發展, HPLC在生物胺檢測方面顯示了其特有的優越性。但大多數生物胺無紫外吸收和熒光發射特性, 為提高分析檢測靈敏度就已經是巔峰仙君和分離選擇性, 通常將生物胺衍生, 衍生方式有柱前衍生法[10]和柱後衍生法[11]。本文采︻用丹酰氯柱前衍生HPLC法同時測定了市場上的8種臭豆腐和10種腐乳中色¤胺、苯乙胺、腐胺、屍胺、組胺、酪胺、亞精胺、精胺的含量，並繪制了這8種生╳物胺的標準曲線，同時對結果進∏行了比較，希望能夠為國內食品行業中臭□　豆腐和腐乳中生第二寶殿就可以占據利潤第一物胺的檢測研究提供有益參考。

1 材料ξ與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

色胺(TRY)、苯乙胺(PHE)、腐胺(PUT)、屍胺(CAD)、組胺(HIS)、酪胺(TYR)、亞精胺(SPD)、精胺(SPM) 、丹酰氯, 均購自Sigma公司;乙腈、丙酮, 均為HPLC級;超純水(南京總馨純水設備公司生產☆的型號為MDL9000(B)-H-30型臺式實驗室超純水系統制得), 其他試劑均為分析純。

臭豆腐和腐乳：購於Ψ 南京市場。

生物胺標準儲備液: 準確稱取適量生物胺標準品, 用0.4 mol·L-1高氯酸(HClO4)分別配制成1 mg·mL-1的標準※儲備液, 鋁箔避光、4 ℃保存, 根據需要▂用0.4 mol·L-1高氯酸將儲備液稀釋到適當的中間濃度。

丹酰氯衍那也簡單生劑：準確稱取丹酰▃氯500 mg至50 mL棕色容量瓶中，用10 mg·mL-1丙酮溶解 陽正天並定容。

1.1.2 主要↓儀器與設備

Waters液相色譜系統(柱溫箱、Empower p ro色譜軟件); Waters Alliance 2695 Separations Module, Waters 2487 Dual λ Absorbance Detector, AgilentZORBAX XDB-C18 (4.6×250mm2, 5μm)

1.2 方法

1.2.1樣品處理

1.2.1.1標準樣品

準確稱▲取色胺、苯乙胺、腐胺、屍胺、組胺、酪胺、亞精胺、精胺各50 mg，用0.4 mol·L-1的高氯酸(HClO4)定容至50 mL，並分別稀釋制♂成終濃度分別為：0.5、1.0、2.0、5.0、10、20 μg·mL-1的混合標準溶液。取1mL的標⊙準品混合溶液，加入200μL 2 mol·L-1 NaOH使之呈堿性，再加入300 μL飽和NaHCO3溶液進行緩沖，然後再加∞入2 mL丹磺酰氯(dansyl chloride)溶液(10 mg·mL-1溶於丙酮)，丹磺酰氯溶液在室溫下處於黑暗中反應處理。30 min後加入100 μLNH4OH中止反應。加入乙腈使終體積 嗡為5 mL。衍生處理愕然後0.45 μm濾膜過濾，用於分↘析檢測。

檢測結果以標準◥品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線。

1.2.1.2 樣品

分別▂準確稱取5 g臭豆腐，剪碎加入20 mL的0.4 mol·L-1的高氯酸(HClO4)，勻漿機上ζ　徹底勻漿，冷凍離心機4℃、2500 rpm離心10 min，取上清液;沈澱部分如前●方法再重新提取。取二看著一臉冷酷次的上清液用0.4 mol·L-1的高㊣氯酸稀釋到50 mL。取1 mL樣液同標準溶液進行柱前衍生。

腐乳樣品制法同上。

1.2.2 色譜條件

柱溫：30℃;流速：1.0 mL·min-1;進樣量：20 uL;檢測波長：254 nm;流動相：水(A溶液)和乙腈acetonitrile(B溶液)，按下面的梯了度運行。

2 結果與分析

2.2 臭豆腐和腐乳中生物胺的種類及含量

利用本文建立的方法對不同種類的臭豆腐和腐乳中的8種生物胺含◇量進行測定，結果見表2。

實驗采用乙睛露出了里面閃爍著火紅色光芒和水為流動相，以表1所示〓的梯度程序洗脫。標準品你和水元波和樣品結果均表明8種組分能○有效分離，且≡峰形對稱，沒有拖尾等現象(見圖1和圖2)。此外，使用該流動- 相可在前5 min內流【出全部溶劑峰及其他雜質峰，25 min左右試樣中生物胺可被全部洗脫。

由圖1與圖2的對比分析可見，標準品色譜圖胸口中，色胺、苯乙〖胺的吸收峰較低，其余6種生物胺的吸收峰相∮差不大，且以腐胺的吸收峰為最高。A4樣品董家生物胺色譜圖中，色胺、苯乙胺和酪胺的吸收峰較標準品都較高，其中酪胺的吸收峰為8種生物胺中最高。

由表2可見，不同公司生產♂的腐乳生物胺含量有明∩顯的差異，其中以M公那他和大寨主兩人出手司生產的A3腐乳樣品生物胺總量最少，X公司生產的A8腐◤乳樣品生物胺含量最高。A3腐乳樣品的生◢物胺總量僅為13.614 mg·100g-1，A8腐乳樣品的生物胺總量為336.696 mg·100g-1。我們認為，這可能看無廣告與不同公司生產腐乳的生產地區、原料、加工工藝及貯藏方式等◣的不同有關。但是即使是同一家公司生產的腐乳生物胺含量也墨麒麟一愣有明顯的差異，如N公司生產的A5腐乳樣品與A6腐乳樣╳品比較，A5腐乳樣品的生物胺總身上九色光芒一閃量僅為16.603 mg·100g-1，A6腐乳樣品的生物胺總量為326.389 mg·100g-1。這可能與不同腐乳→樣品中添加的調◣味料的不同有關。與腐乳相比，臭豆腐中生物胺的含量①則明顯少得多，A11臭豆＠腐樣品中的生物胺含量最高，亦僅有23.897 mg·100g-1。由此可見，臭豆腐和腐乳中生物胺的種類與含∩量的差別很可能與其加№工工藝的不同有關。因為腐乳中的生物胺含量同時明顯比臭豆腐中的生物胺含量多指著千仞沉聲道得多，而生物胺主要通過氨基酸的脫羧作用生成，由▃此我們可以認為，氨基酸的脫羧作用主要發生緣故在發酵過程中。

3 討 論

生物胺中腐胺、屍胺、組胺、酪胺因為具有一定的毒性，是過去與食品的衛生安全最相關的，故我們主要對♀臭豆腐和腐乳中的這四種胺進放心行了分析∏。腐乳樣品中A6、A8、A9腐乳樣品中的腐胺▲含量偏高，其中A6腐乳∑樣品是↙N公司產品，A8、A9腐乳樣▽品是X公司產品;腐乳樣品中A2、A6、A9、A10腐乳樣品中的屍胺含量偏高，其中A2腐乳神界通道樣品是M公司產品，A6腐乳樣品看著底下王家和董家是N公司產品，A9腐乳樣品是X公司產品，A10腐乳樣品是Y公司產品;腐乳樣品中A2、A6、A8、A9腐乳樣品中的組胺↘含量偏高，其中A2腐乳樣品是M公司產品，A6腐乳樣品是N公司產品，A8、A9腐乳樣品是X公司產品;腐乳樣品中A4、A6、A8、A9腐乳樣品中的酪胺含量偏高，其中A4腐乳樣品是M公司產品，A6腐乳樣品是N公司產品，A8、A9腐乳樣品是X公司產品。這可能與生產地區、原料、調味料、加工工藝△及貯藏方式等的不同有關。臭豆腐樣品中A11、A13樣品中的腐胺含量偏高，A11、A12樣品中的屍胺含量偏高，A11樣品中的酪胺含量偏高。這可能與」原料、加工工藝及▓貯藏方式等的不同有關。

大量研已經不是你究表明，組胺是對人體最有害的一種，而酪胺在一愣量上是最重要的，並且其它生←物胺的存在可能加強酪胺對人↘類健康的副作用。攝入 8～40mg 組又是你胺產生輕微中毒癥狀，超過 40mg產生中等中◤毒癥狀，超過 100mg 產生嚴重中毒癥狀。酪胺超過 l00mg會引起偏頭痛少主。所以，通常被看ζ　作生物胺中最重要的兩類，並以這兩種生物胺作為測定指標。歐盟、美國都對部分食品中組胺含量做●了限量要求：美國FDA根據對爆發組胺中毒的不然大量數據研究結果確定組胺的危害和可無法相提并論作用水平為500 mg·kg-1，同時要求進口水產品組胺不得超過50 mg·kg-1;歐盟規定鯖科魚類中組胺含量不得超100 mg·kg-1，其他食品中組胺不得超過100 mg·kg-1，酪胺ω不得超過100～800 mg·kg-1。我國規定勢力鮐魚中組胺不得超過1000 mg·kg-1，其他海水魚不得超過300 mg·kg-1 [12]。

臭豆腐中組胺平均含量為0.273 mg·100g-1，最大值為0.526 mg·100g-1;腐乳中組胺平均含量◇為11.801 mg·100g-1，最大值為42.949 mg·100g-1。臭豆腐中酪胺平均含量∞為0.371 mg·100g-1，最大值為2.211 mg·100g-1;腐乳中酪胺平均含量為45.876 mg·100g-1，最大值為133.121 mg·100g-1。臭豆腐和腐乳中組胺◢含量均未超標，但腐乳中的組胺含量遠遠超出①臭豆腐中的組胺含量。臭豆腐中酪胺含量未超標，但是腐乳中酪胺含量則東北三百里遠遠超出標準。故本次實驗所用的腐乳樣品就酪胺含量而言，一半是不及格，沒有達到衛生標準的。

不同小吃攤點的臭↑豆腐生物胺含量相差並不大，而不同的腐乳生物胺含量各異，這說明雖然臭豆腐等非發酵食品本身含有低濃度的生物胺,但食品中生物胺主要還是由氨◆基酸經乳◥酸菌脫羧形成,而且高濃度的生物胺往往出現在發酵食品中,因為發酵食品更容易我沒事汙染具有高活性氨基酸就絕不會一個人來殺我脫羧酶的微生物。(周 薇)

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